خبرني - عادة ما يكون نوع ودرجة السرطان واضحين عند رؤية الخلايا تحت المجهر بعد المعالجة الروتينية والتلوين ، ولكن هذا ليس هو الحال دائمًا. يحتاج أخصائي علم الأمراض أحيانًا إلى استخدام إجراءات أخرى لإجراء التشخيص.

البقع النسيجية
تستخدم هذه الاختبارات مجموعة متنوعة من الأصباغ الكيميائية التي يتم سحبها إلى مواد كيميائية معينة موجودة في الخلايا السرطانية. بقعة المخاط ، على سبيل المثال ، تنجذب إلى المخاط. تحت المجهر ، ستظهر قطرات المخاط داخل الخلية المعرضة لهذه الصبغة باللون الوردي والأحمر. إذا اشتبه أخصائي علم الأمراض في وجود سرطان غدي (نوع من السرطان الغدي) في عينة الرئة ، يمكن أن تساعد هذه البقعة. نظرًا لأن الأورام الغدية يمكن أن تخلق المخاط ، فإن اكتشاف البقع الوردية الحمراء في خلايا سرطان الرئة سيشير إلى أن التشخيص هو سرطان غدي لأخصائي علم الأمراض.

يتم استخدام أنواع أخرى من الصبغات المحددة في المختبر للتعرف على الكائنات الحية الدقيقة (الجراثيم) مثل البكتيريا والفطريات في الأنسجة، بالإضافة إلى فرز أنواع مختلفة من الأورام. وهذا أمر بالغ الأهمية لأن مرضى السرطان قد يصابون بالعدوى نتيجة لعلاجهم أو نتيجة للمرض نفسه. كما أنه مهم أيضًا في تشخيص السرطان نظرًا لأن بعض الاضطرابات المعدية تخلق كتلًا يمكن الخلط بينها وبين السرطان حتى تظهر البقع الكيميائية النسيجية أن المريض يعاني من عدوى بدلاً من السرطان.

البقع المناعية
المناعية (IHC) أو البقع المناعية هي فئة أخرى من الاختبارات المحددة التي يمكن أن تكون ذات قيمة عالية. الفكرة الأساسية وراء هذه الإستراتيجية هي أن بروتين مناعي يسمى الجسم المضاد سيربط نفسه بجزيئات معينة في أو في الخلية التي تسمى المستضدات. تحدد الأجسام المضادة المستضدات الخاصة بها وتلتزم بها. تحتوي كل من الخلايا الطبيعية والخلايا الخبيثة على مستضدات خاصة بها. إذا كانت الخلية تحتوي على مستضد معين ، فسيتم سحب الجسم المضاد الذي يتطابق مع المستضد إليها. لمعرفة ما إذا كانت الأجسام المضادة قد تم سحبها إلى الخلايا ، يتم إعطاء المواد الكيميائية التي تسبب تغيير لون الخلايا فقط عند وجود جسم مضاد معين (وبالتالي المستضد).

عادة ما تصنع أجسامنا أجسامًا مضادة تتعرف على المستضدات الموجودة على الجراثيم وتساعدنا في حمايتنا من العدوى. تختلف الأجسام المضادة المستخدمة في بقع IHC. لقد تم صنعها في المختبر للتعرف على المستضدات المرتبطة بالسرطان وأمراض أخرى.

تعتبر بقع IHC مفيدة جدًا في تشخيص الأورام الخبيثة المحددة. على سبيل المثال ، قد تحتوي خزعة العقدة الليمفاوية التي تتم معالجتها بشكل روتيني على خلايا تبدو بوضوح مثل السرطان ، ولكن قد لا يتمكن اختصاصي علم الأمراض من معرفة ما إذا كان السرطان قد بدأ في العقدة الليمفاوية أو انتشر إلى العقد الليمفاوية من أي مكان آخر في الجسم. سيكون سرطان الغدد الليمفاوية هو التشخيص إذا بدأ السرطان في العقدة الليمفاوية. يمكن أن يكون سرطانًا نقيليًا إذا بدأ السرطان في مكان آخر من الجسم وانتشر إلى العقدة الليمفاوية. هذا الاختلاف مهم لأن خيارات العلاج تختلف اعتمادًا على نوع السرطان (بالإضافة إلى بعض العوامل الأخرى أيضًا).

هناك المئات من الأجسام المضادة المستخدمة في اختبارات IHC. بعضها محدد تمامًا ، مما يعني أنها تتفاعل مع نوع واحد فقط من السرطان. قد يتفاعل البعض الآخر مع أنواع قليلة من السرطان ، لذلك يمكن اختبار العديد من الأجسام المضادة لتحديد نوع السرطان. من خلال النظر إلى هذه النتائج جنبًا إلى جنب مع ظهور السرطان بعد معالجة عينة الخزعة وموقعها ومعلومات أخرى حول المريض (العمر والجنس وما إلى ذلك) ، غالبًا ما يكون من الممكن تصنيف السرطان بطريقة يمكن أن تساعد في اختيار أفضل علاج .

تُستخدم بقع IHC بشكل شائع لتصنيف الخلايا ، ومع ذلك ، يمكن أيضًا استخدامها للكشف عن الخلايا السرطانية أو التعرف عليها. في حين أن عددًا كبيرًا من الخلايا السرطانية قد انتقل إلى عقدة ليمفاوية قريبة ، يمكن لطبيب علم الأمراض تحديد هذه الخلايا بسهولة باستخدام البقع التقليدية عند النظر إلى الأنسجة الليمفاوية تحت المجهر. ومع ذلك ، إذا كانت العقدة تحتوي فقط على عدد قليل من الخلايا السرطانية ، فقد يكون من الصعب تمييز الخلايا باستخدام البقع العادية. يمكن أن تساعد بقع IHC في هذه الحالة. بمجرد أن يحدد اختصاصي علم الأمراض نوع الورم الخبيث المراد فحصه ، قد يختار واحدًا أو أكثر من الأجسام المضادة التي ثبت أنها تتفاعل مع تلك الخلايا. تتم إضافة المزيد من المواد الكيميائية بحيث يتغير لون الخلايا السرطانية وتبرز بوضوح من الخلايا الطبيعية من حولها. لا تُستخدم بقع IHC عمومًا لفحص الأنسجة من تشريح العقد الليمفاوية (التي تزيل عددًا كبيرًا من العقد) ، ولكنها تُستخدم أحيانًا في خزعات العقد الليمفاوية الخافرة. 

استخدام متخصص آخر لهذه البقع هو المساعدة في التمييز بين الغدد الليمفاوية التي تحتوي على سرطان الغدد الليمفاوية وتلك المتورمة من الأعداد المتزايدة من خلايا الدم البيضاء الطبيعية (عادة كاستجابة للعدوى). توجد مستضدات معينة على سطح خلايا الدم البيضاء تسمى الخلايا الليمفاوية. تحتوي أنسجة العقدة الليمفاوية الحميدة (غير السرطانية) على أنواع مختلفة من الخلايا الليمفاوية مع مجموعة متنوعة من المستضدات على سطحها. في المقابل ، تبدأ السرطانات مثل سرطان الغدد الليمفاوية بخلية واحدة غير طبيعية ، وبالتالي فإن الخلايا السرطانية التي تنمو من تلك الخلية تشترك عادةً في السمات الكيميائية للخلية غير الطبيعية الأولى. هذا مفيد بشكل خاص في تشخيص سرطان الغدد الليمفاوية. إذا كانت معظم الخلايا في خزعة العقدة الليمفاوية تحتوي على نفس المستضدات على سطحها ، فإن هذه النتيجة تدعم تشخيص سرطان الغدد الليمفاوية.

يمكن أن تساعد بعض بقع IHC في التعرف على مواد معينة في الخلايا السرطانية التي تؤثر على تشخيص المريض و / أو ما إذا كان من المحتمل أن يستفيدوا من بعض الأدوية. على سبيل المثال ، يتم استخدام IHC بشكل روتيني للتحقق من وجود مستقبلات هرمون الاستروجين في خلايا سرطان الثدي. من المرجح أن يستفيد المرضى الذين تحتوي خلاياهم على هذه المستقبلات من أدوية العلاج الهرموني ، التي تمنع إنتاج هرمون الاستروجين أو تأثيراته. يمكن أن تساعد IHC أيضًا في تحديد النساء المصابات بسرطان الثدي اللواتي من المرجح أن يستفدن من الأدوية التي تمنع التأثيرات المعززة للنمو لمستويات عالية بشكل غير طبيعي من بروتين HER2.

المجهر الإلكتروني
يستخدم مجهر المختبر الطبي النموذجي شعاعًا من الضوء العادي للنظر في العينات. أداة أكبر وأكثر تعقيدًا تسمى ميكروسكوب الكتروني يستخدم حزم من الإلكترونات. تبلغ قوة تكبير المجهر الإلكتروني حوالي 1,000 مرة أكبر من قوة المجهر الضوئي العادي. نادرًا ما تكون هذه الدرجة من التكبير ضرورية لتحديد ما إذا كانت الخلية سرطانية أم لا. لكنها تساعد أحيانًا في العثور على تفاصيل دقيقة جدًا عن بنية الخلية السرطانية التي توفر أدلة على نوع السرطان الدقيق.

تحت المجهر الضوئي القياسي، قد تبدو بعض حالات سرطان الجلد، وهو سرطان جلدي مميت للغاية، وكأنها سرطانات أخرى. في أغلب الأحيان، يمكن لبقع IHC التعرف على هذه الأورام الميلانينية. إذا لم تكشف هذه الاختبارات عن أي شيء، فيمكن استخدام المجهر الإلكتروني للبحث عن الهياكل المجهرية التي تسمى الجسيمات الميلانينية داخل خلايا سرطان الجلد. وهذا يساعد في تحديد نوع السرطان وتحديد خيار العلاج الأفضل.

التدفق الخلوي
غالبًا ما يستخدم قياس التدفق الخلوي لاختبار الخلايا من نخاع العظام والعقد الليمفاوية وعينات الدم. إنه دقيق للغاية في اكتشاف النوع الدقيق لابيضاض الدم أو سرطان الغدد الليمفاوية الذي يعاني منه الشخص. كما أنه يساعد في التفرقة بين الأورام اللمفاوية والأمراض غير السرطانية في الغدد الليمفاوية.

يتم علاج عينة من الخلايا المأخوذة من الخزعة ، أو عينة علم الخلايا ، أو عينة الدم بأجسام مضادة خاصة. يلتصق كل جسم مضاد فقط بأنواع معينة من الخلايا التي تحتوي على المستضدات التي تناسبه. ثم يتم تمرير الخلايا أمام شعاع الليزر. إذا كانت الخلايا تحتوي الآن على تلك الأجسام المضادة ، فإن الليزر سيجعلها تصدر ضوءًا يتم قياسه وتحليله بواسطة الكمبيوتر.

يستخدم تحليل حالات اللوكيميا أو الأورام اللمفاوية المشتبه بها عن طريق قياس التدفق الخلوي نفس المبادئ الموضحة في قسم الكيمياء النسيجية المناعية:

العثور على نفس المواد على سطح معظم الخلايا في العينة تشير إلى أنها جاءت من خلية واحدة غير طبيعية ومن المحتمل أن تكون سرطانًا.
إيجاد عدة أنواع مختلفة من الخلايا مع مجموعة متنوعة من المستضدات يعني أن العينة أقل عرضة لاحتواء اللوكيميا أو سرطان الغدد الليمفاوية.
يمكن أيضًا استخدام قياس التدفق الخلوي لقياس كمية الحمض النووي في الخلايا السرطانية (تسمى بلادي). بدلاً من استخدام الأجسام المضادة للكشف عن مستضدات البروتين ، يمكن معالجة الخلايا بأصباغ خاصة تتفاعل مع الحمض النووي.

إذا كانت هناك كمية طبيعية من الحمض النووي ، فيُقال إن الخلايا موجودة ثنائي الصبغيات.
إذا كانت الكمية غير طبيعية ، يتم وصف الخلايا على أنها اختلال الصيغة الصبغية. تميل سرطانات اختلال الصيغة الصبغية في معظم (وليس كل) الأعضاء إلى النمو والانتشار بشكل أسرع من الأورام ثنائية الصبغيات.
استخدام آخر لقياس التدفق الخلوي هو قياس جزء المرحلة S ، وهو النسبة المئوية للخلايا في عينة تكون في مرحلة معينة من انقسام الخلية تسمى تركيب or المرحلة S. كلما زاد عدد الخلايا الموجودة في المرحلة S ، زادت سرعة نمو الأنسجة وزادت احتمالية الإصابة بالسرطان. 

قياس الصورة الخلوي
مثل قياس التدفق الخلوي ، يستخدم هذا الاختبار الأصباغ التي تتفاعل مع الحمض النووي. ولكن بدلاً من تعليق الخلايا في تيار من السائل وتحليلها باستخدام الليزر ، يستخدم القياس الخلوي للصور كاميرا رقمية وجهاز كمبيوتر لقياس كمية الحمض النووي في الخلايا على شريحة ميكروسكوبية. مثل قياس التدفق الخلوي ، يمكن للقياس الخلوي بالصور أيضًا تحديد تعدد الخلايا السرطانية.

الاختبارات الجينية
علم الوراثة الخلوية
تحتوي الخلايا البشرية الطبيعية على 46 كروموسومًا (قطع من الحمض النووي والبروتينات التي تتحكم في نمو الخلايا ووظائفها). تحتوي بعض أنواع السرطان على كروموسومات غير طبيعية واحدة أو أكثر. يساعد التعرف على الكروموسومات غير الطبيعية في تحديد هذه الأنواع من السرطان. هذا مفيد بشكل خاص في تشخيص بعض الأورام اللمفاوية وسرطان الدم والساركوما. حتى عندما يكون نوع السرطان معروفًا ، قد تساعد الاختبارات الوراثية الخلوية في التنبؤ بنظرة المريض. في بعض الأحيان يمكن أن تساعد الاختبارات في التنبؤ بأدوية العلاج الكيميائي التي من المرجح أن يستجيب لها السرطان.

يمكن العثور على عدة أنواع من التغيرات الكروموسومية في الخلايا السرطانية:

A النقل يعني أن جزءًا من كروموسوم واحد قد انقطع وهو موجود الآن على كروموسوم آخر.
An انقلاب يعني أن جزءًا من الكروموسوم مقلوب (بترتيب عكسي الآن) لكنه لا يزال مرتبطًا بالكروموسوم الأيمن.
A حذف يشير إلى فقد جزء من الكروموسوم.
A تكرار يحدث عندما يتم نسخ جزء من الكروموسوم ، وتوجد نسخ كثيرة جدًا منه في الخلية.
في بعض الأحيان ، قد يتم اكتساب أو فقدان كروموسوم كامل في الخلايا السرطانية.

بالنسبة للاختبار الوراثي الخلوي ، تزرع الخلايا السرطانية في أطباق معملية لمدة أسبوعين تقريبًا قبل أن يتم فحص كروموسوماتها تحت المجهر. لهذا السبب ، عادة ما يستغرق الأمر حوالي 2 أسابيع للحصول على النتائج.

تهجين الفلورسنت في الموقع
يشبه FISH ، أو التهجين الفلوري في الموقع ، اختبار الوراثة الخلوية. يمكنه الكشف عن غالبية التغيرات الصبغية المرئية تحت المجهر في الاختبارات الوراثية الخلوية الروتينية. يمكنه أيضًا اكتشاف التغييرات الصغيرة جدًا بحيث لا يمكن اكتشافها عن طريق الاختبارات الوراثية الخلوية التقليدية.

يستخدم FISH الأصباغ الفلورية المرتبطة بشظايا الحمض النووي التي تتصل فقط بأقسام محددة من الكروموسومات. يمكن أن يكتشف FISH التغيرات في الكروموسومات مثل الانتقالات ، والتي تكون مفيدة في تصنيف أنواع معينة من سرطان الدم.

يعد العثور على تغييرات معينة في الكروموسومات أمرًا مهمًا أيضًا في تحديد ما إذا كانت بعض الأدوية المستهدفة قد تساعد المرضى الذين يعانون من بعض أنواع السرطان. على سبيل المثال ، يمكن أن يظهر FISH عندما يكون هناك عدد كبير جدًا من النسخ (تسمى توسيع) من جين HER2 ، والذي يمكن أن يساعد الأطباء في اختيار أفضل علاج لبعض النساء المصابات بسرطان الثدي.

على عكس الاختبارات الوراثية الخلوية القياسية ، ليس من الضروري إنماء الخلايا في أطباق المختبر من أجل FISH. وهذا يعني أن نتائج FISH ستكون متاحة في وقت أقرب بكثير ، وعادة في غضون أيام قليلة.

الاختبارات الجينية الجزيئية
يمكن استخدام اختبارات أخرى للحمض النووي والحمض النووي الريبي للعثور على معظم الانتقالات التي تم العثور عليها بواسطة الاختبارات الوراثية الخلوية. يمكنهم أيضًا العثور على بعض عمليات النقل التي تنطوي على أجزاء من الكروموسومات صغيرة جدًا بحيث لا يمكن رؤيتها تحت المجهر مع الاختبار الوراثي الخلوي المعتاد. يمكن أن يساعد هذا النوع من الاختبارات المتقدمة في تصنيف بعض أنواع اللوكيميا ، وفي حالات أقل ، بعض الأورام اللحمية والسرطانات. هذه الاختبارات مفيدة أيضًا بعد العلاج للعثور على أعداد صغيرة من الخلايا السرطانية المتبقية لابيضاض الدم والتي قد يتم تفويتها تحت المجهر.

يمكن للاختبارات الجينية الجزيئية أيضًا تحديد الطفرات (التغيرات غير الطبيعية) في مناطق معينة من الحمض النووي التي تتحكم في نمو الخلايا. قد تجعل بعض هذه الطفرات السرطانات أكثر عرضة للنمو والانتشار. في بعض الحالات ، يمكن أن يساعد تحديد طفرات معينة الأطباء في اختيار العلاجات التي من المرجح أن تكون فعالة.

تسمى بعض المواد مستقبلات المستضد توجد على سطح خلايا جهاز المناعة تسمى الخلايا الليمفاوية. تحتوي أنسجة العقدة الليمفاوية الطبيعية على الخلايا الليمفاوية مع العديد من مستقبلات المستضدات المختلفة ، والتي تساعد الجسم على الاستجابة للعدوى. لكن بعض أنواع سرطان الغدد الليمفاوية وسرطان الدم تبدأ من خلية ليمفاوية واحدة غير طبيعية. هذا يعني أن كل هذه الخلايا السرطانية لها نفس مستقبلات المستضد. تعد الاختبارات المعملية للحمض النووي الخاص بجينات مستقبلات المستضدات في كل خلية طريقة حساسة للغاية لتشخيص وتصنيف هذه السرطانات.

تفاعل البلمرة المتسلسل (PCR): هذا اختبار جيني جزيئي حساس للغاية للعثور على تسلسلات معينة من الحمض النووي ، مثل تلك التي تحدث في بعض أنواع السرطان. PCR النسخ العكسي (أو RT-PCR) هي طريقة تستخدم لاكتشاف كميات صغيرة جدًا من الحمض النووي الريبي. الحمض النووي الريبي مادة مرتبطة بالحمض النووي وهي ضرورية للخلايا لصنع البروتينات. هناك رنا محددة لكل بروتين في أجسامنا. يمكن استخدام RT-PCR للعثور على الخلايا السرطانية وتصنيفها.

تتمثل إحدى مزايا RT-PCR في أنه يمكنه اكتشاف أعداد صغيرة جدًا من الخلايا السرطانية في عينات الدم أو الأنسجة التي قد تفوتها الاختبارات الأخرى. يتم استخدام RT-PCR بشكل روتيني للكشف عن أنواع معينة من خلايا سرطان الدم التي تبقى بعد العلاج ، ولكن قيمتها بالنسبة لأنواع السرطان الأكثر شيوعًا أقل تأكيدًا. العيب هو أن الأطباء ليسوا متأكدين دائمًا ما إذا كان وجود عدد قليل من الخلايا السرطانية في مجرى الدم أو العقدة الليمفاوية يعني أن المريض سيطور بالفعل نقائل بعيدة ستنمو بشكل كافٍ لإحداث أعراض أو التأثير على البقاء. في علاج المرضى الذين يعانون من أكثر أنواع السرطان شيوعًا ، لا يزال من غير الواضح ما إذا كان العثور على عدد قليل من الخلايا السرطانية بهذا الاختبار يجب أن يكون عاملاً في اختيار خيارات العلاج.

يمكن أيضًا استخدام RT-PCR لتصنيف الخلايا السرطانية. تقيس بعض اختبارات RT-PCR مستويات واحد أو حتى عدة RNAs في نفس الوقت. من خلال مقارنة مستويات الحمض النووي الريبي المهم ، يمكن للأطباء في بعض الأحيان التنبؤ بما إذا كان من المحتمل أن يكون السرطان أكثر أو أقل عدوانية (من المحتمل أن ينمو وينتشر) مما هو متوقع بناءً على شكله تحت المجهر. يمكن أن تساعد هذه الاختبارات في بعض الأحيان في التنبؤ بما إذا كان السرطان سيستجيب لبعض العلاجات أم لا.

المصفوفات الدقيقة للتعبير الجيني: هذه الأجهزة الصغيرة تشبه في بعض النواحي رقائق الكمبيوتر. تتمثل ميزة هذه التقنية في أنه يمكن مقارنة المستويات النسبية لمئات أو حتى الآلاف من RNAs المختلفة من عينة واحدة في نفس الوقت. تخبرنا النتائج عن الجينات النشطة في الورم. يمكن أن تساعد هذه المعلومات في بعض الأحيان في التنبؤ بتوقعات المريض (التوقعات) أو الاستجابة لبعض العلاجات.

يُستخدم هذا الاختبار أحيانًا عندما ينتشر السرطان في عدة أجزاء من الجسم لكن الأطباء غير متأكدين من أين بدأ. (تسمى هذه السرطانات المجهولة الأولية.) يمكن مقارنة نمط الحمض النووي الريبي لهذه السرطانات بأنماط الأنواع المعروفة من السرطان لمعرفة ما إذا كانت متطابقة. معرفة من أين بدأ السرطان مفيد في اختيار العلاج. يمكن أن تساعد هذه الاختبارات في تضييق نطاق نوع السرطان ، لكنها لا تستطيع دائمًا تحديد نوع السرطان بدقة. 

تسلسل الحمض النووي: على مدى العقدين الماضيين ، تم استخدام تسلسل الحمض النووي لتحديد الأشخاص الذين ورثوا طفرات جينية تزيد بشكل كبير من خطر الإصابة بأنواع معينة من السرطان. في هذه الحالة ، يستخدم الاختبار بشكل عام الحمض النووي المأخوذ من خلايا الدم للمرضى الذين يعانون بالفعل من بعض أنواع السرطان (مثل سرطان الثدي أو سرطان القولون) أو من دم أقاربهم الذين ليس لديهم أي سرطان معروف ولكن قد يكونون في خطر متزايد.

بدأ الأطباء في استخدام تسلسل الحمض النووي لبعض أنواع السرطان للمساعدة في التنبؤ بالأدوية المستهدفة التي من المرجح أن تعمل في المرضى الأفراد. تسمى هذه الممارسة أحيانًا "علم الأورام الشخصي" أو "علم الأورام الدقيق". في البداية ، تم إجراء تسلسل الحمض النووي لجين واحد فقط أو لعدد قليل من الجينات المعروف أنها تتأثر غالبًا بأنواع معينة من السرطان. أتاح التقدم الأخير إمكانية تسلسل العديد من الجينات أو حتى جميع الجينات من السرطان (على الرغم من أن هذا لا يتم بشكل روتيني). تُظهر معلومات التسلسل هذه أحيانًا طفرات غير متوقعة في الجينات التي تتأثر بشكل أقل تكرارًا وقد تساعد الطبيب في اختيار دواء لم يكن من الممكن التفكير فيه وتجنب الأدوية الأخرى التي من غير المرجح أن تكون مفيدة.